Taller Microscopía de Fluorescencia y Confocal

A continuación algunos ejemplos de imágenes obtenidas en el microscopio de barrido láser confocal Leica TCS SP5 del Institut Pasteur de Montevideo con el grupo que participó en el taller 2015.


Serie de imágenes de diferentes canales de una sección óptica a partir de retina de embrión de pez cebra (Danio rerio) de la línea Sofa1, a las 60 horas post-fecundación. 

Cian: núcleos marcados con verde de metilo; excitación a 633 nm.
Magenta: fotorreceptores marcados con Crx:CFP; excitación a 405 nm.
Verde: células amacrinas y horizontales marcadas con Ptf1:EGFP; excitación a 488 nm.
Rojo: células ganglionares de la retina, células amacrinas y fotorreceptores marcados con Atoh7:Gap43-mRFP; excitación a 543 nm.

Objetivo: 20x, inmersión en glicerol.




Imagen compuesta de tres canales de una sección óptica a partir de retina de embrión de pez cebra (Danio rerio) de la línea Sofa1, a las 60 horas post-fecundación. 

Cian: núcleos marcados con verde de metilo; excitación a 633 nm.
Verde: células amacrinas y horizontales marcadas con Ptf1:EGFP; excitación a 488 nm.
Rojo: células ganglionares de la retina, células amacrinas y fotorreceptores marcados con Atoh7:Gap43-mRFP; excitación a 543 nm..

Objetivo: 20x, inmersión en glicerol.







Animación de serie de secciones en dos canales de un stack a partir de retina de embrión de pez cebra (Danio rerio) de la línea Sofa1, a las 60 horas post-fecundación. Se observa la salida del nervio óptico (rojo).

Verde: células amacrinas y horizontales marcadas con Ptf1:EGFP; excitación a 488 nm.
Rojo: células ganglionares de la retina, células amacrinas y fotorreceptores marcados con Atoh7:Gap43-mRFP; excitación a 543 nm..

Objetivo: 20x, inmersión en glicerol.





Reconstrucción tridimensional en dos canales de un stack a partir de retina de embrión de pez cebra (Danio rerio) de la línea Sofa1, a las 60 horas post-fecundación. Se observa la salida del nervio óptico (rojo).

Verde: células amacrinas y horizontales marcadas con Ptf1:EGFP; excitación a 488 nm.
Rojo: células ganglionares de la retina, células amacrinas y fotorreceptores marcados con Atoh7:Gap43-mRFP; excitación a 543 nm..

Objetivo: 20x, inmersión en glicerol.



Todas las imágenes fueron obtenidas a partir de un embrión de pez cebra de la línea transgénica Sofa1, fijado y procesado para marcar ADN con verde de metilo. El embrión fue montado intacto en glicerol al 75% Tris 0.1 M pH 8. 

Por más información sobre la línea Sofa1: http://dev.biologists.org/content/141/9/1971.long

Sobre verde de metilo como colorante fluorescente de ADN: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24671497