Módulo 7 - Diferenciación neural 2021

Artículos a discutir en seminarios (preprints de bioRxiv, con acceso libre):Brault et al. 2021 Regulation of neuronal progenitor delamination by dynein driven post Golgi apical transport . 

https://doi.org/10.1101/2021.07.23.453475

Amini et al. 2021 Amoeboid-like neuronal migration ensures correct horizontal cell layer formation in the developing vertebrate retina.

https://doi.org/10.1101/2021.10.15.464510

Burute et al. 2021 Matrix elasticity gradients guide neuronal polarity by controlling microtubule network mobility . https://doi.org/10.1101/2021.07.22.453336

Zúñiga et al. 2021 Cables1 links Slit/ Robo and Wnt /Frizzled signaling in commissural axon guidance

https://doi.org/10.1101/2021.10.19.464945

Práctico: “Manipulación génica en embriones de pez cebra” 

Docente responsable: Flavio Zolessi

Ayudantes: Lucía Veloz 

Introducción:

El embrión de pez cebra (Danio rerio) presenta múltiples ventajas para la experimentación en Biología del Desarrollo, entre las cuales se cuentan la sencillez de mantenimiento de los adultos y de obtención de huevos fértiles, embriones que son pequeños y transparentes hasta etapas avanzadas del desarrollo y la gran accesibilidad a la manipulación genética. Esta va desde la expresión permanente o transitoria de genes exógenos (transgénesis), la existencia de una gran biblioteca de mutantes relativamente bien caracterizada, la reducción de la expresión mediante oligómeros antisentido (como los morfolinos) o, en los últimos años, la posibilidad de realizar knock-outs génicos dirigidos (por ejemplo mediante la técnica de CRISPR). El objetivo de este práctico es aproximar a los estudiantes de Biología del Desarrollo a algunas de estas tecnologías y su aplicación en embriones de pez cebra.

Cronograma del práctico (tentativo):

Día 1 – Martes 2/11 - 17:00-18:00 - IPMon (feriado, tarea realizada por los docentes)

- Selección de parejas de adultos para obtención de huevos.

Día 2 – Miércoles 3/11 – 9:00-11:00/11:00-13:00 – IPMon (asistencia obligatoria, en dos grupos)

- Obtención, observación y datación de embriones de pez cebra transgénicos.

- Inyección de oligómeros de morfolino y gRNA/Cas9 mRNA para CRISPR en embriones. 

Día 3 – Jueves 4/11 – 10:00-11:30/11:30-13:00 – FCien (asistencia obligatoria, en dos grupos) 

- Observación y datación de embriones inyectados. 

- Fijación de embriones

Día 4 – Viernes 5/11 -  14:00-16:00 - FCien (asistencia no obligatoria)

- Lavado y coloración de embriones con verde de metilo y faloidina-TRITC.

Día 5 – Lunes 8/11 – 9:00-11:00/11:00-13:00 – FCien (asistencia obligatoria, en dos grupos) 

- Montaje de embriones para microscopía.

Día 6 – Miércoles 10/11 – 15:00-16:00/16:00-17:00 – IPMon (asistencia obligatoria, en dos grupos)  

- Observación y registro en microscopio confocal.

Día 7 – Jueves 11/11 – Hora a ajustar – Zoom (asistencia obligatoria)

- Análisis y procesamiento de imágenes usando Fiji.

Día 8 – Viernes 12/11 – 9:30-10:00 – Zoom (asistencia obligatoria)

- Cierre del práctico, discusión.

Carga horaria del práctico por estudiante: obligatoria, 8.5 h; máxima, 11.5 h.

Instancias de evaluación del módulo:

A - Presentación y discusión en los seminarios

B - Informe de práctico: 

Escritura de un proyecto de investigación (como para solicitar financiación por un año), en temas relacionados al módulo, y usando algunas técnicas del práctico. Formato: 1. Título; 2- Antecedentes (no más de 1 carilla); 3- Hipótesis; 4- Objetivos; 5- Estrategia experimental (no más de una carilla de texto; puede incluir figuras de resultados preliminares, usen las fotos del práctico); 6- Resultados esperados e impacto (no más de media carilla).

Formato: electrónico (doc o pdf)

Fecha límite de presentación: jueves 25 de noviembre.

Bibliografía básica para el práctico:

            - The Zebrafish Book –Westerfield M. - http://zfin.org/zf_info/zfbook/zfbk.html

            - Kimmel C.B., Ballard W.W., Kimmel S.R., Ullman B. & Schilling T.F. (1995), Stages of Embryonic Development of the Zebrafish, Developmental Dynamics 203:253-310 - http://zfin.org/zf_info/zfbook/stages/stages.html

            - Bill BR, Petzold AM, Clark KJ, Schimmenti LA, Ekker SC (2009) A primer for morpholino use in zebrafish. Zebrafish. 6(1):69-77. doi: 10.1089/zeb.2008.0555. http://online.liebertpub.com/doi/abs/10.1089/zeb.2008.0555

Descargar este cronograma en pdf.

Material de apoyo para el práctico (incluyendo los textos citados; solo accesible a estudiantes y docentes del curso).