Diferenciación neural

Este módulo se concentra en aspectos celulares del desarollo neural y de la diferenciación neuronal, particularmente en los relacionados a la polaridad celular. Consiste de cuatro instancias en que se combinan teóricos y seminarios, además de un práctico de una semana y media.

Teóricos / Seminarios:Día 1 – Martes 24/10 – 10-12 – Salón 205 - Teórico I. Introducción al desarrollo neural. Polaridad celular en el neuroepitelio. Día 2 – Viernes 27/10 – 10-12 – Salón 205 - Teórico II. Neurogénesis y polaridad celular. - Seminario de discusión de artículos, 1-2. Día 3 – Martes 31/10 – 10-12 – Salón 205 - Teórico III. Migración neuronal. - Seminario de discusión de artículos, 3-4. Día 4 – Viernes 3/11 – 10-12 – Salón 205 - Teórico IV. Polarización neuronal y crecimiento axonal. - Seminario de discusión de artículos, 5-6. Bibliografía básica:  Gilbert SF (2003 en adelante) Developmental Biology.

Célula ganglionar de la retina en embrión de pez cebra (48 hpf).

Imagen de microscopía confocal. Autora: Camila Davison

Práctico: “Manipulación génica en embriones de pez cebra” 

Docente responsable: Flavio Zolessi

Ayudantes: Jimena Montagne y Matías Preza 

Introducción:

El embrión de pez cebra (Danio rerio) presenta múltiples ventajas para la experimentación en Biología del Desarrollo, entre las cuales se cuentan la sencillez de mantenimiento de los adultos y de obtención de huevos fértiles, embriones que son pequeños y transparentes hasta etapas avanzadas del desarrollo y la gran accesibilidad a la manipulación genética. Esta va desde la expresión permanente o transitoria de genes exógenos (transgénesis), la existencia de una gran biblioteca de mutantes relativamente bien caracterizada, la reducción de la expresión mediante oligómeros antisentido (como los morfolinos) o, en los últimos años, la posibilidad de realizar knock-outs génicos dirigidos (por ejemplo mediante la técnica de CRISPR).

El objetivo de este práctico es aproximar a los estudiantes de Biología del Desarrollo a algunas de estas tecnologías y su aplicación en embriones de pez cebra.

Cronograma del práctico:

Día 1 – Lunes 30/10 - 17:00-18:00 - Salón 209 - Introducción teórica a los métodos de manipulación de embriones de pez cebra y presentación del práctico. Día 2 – Martes 31/10 – 14:00-17:00/16:30-18:30 – IPMont - Observación y datación de embriones de pez cebra. - Selección de parejas de adultos para obtención de huevos. Día 3 – Miércoles 1/11 – 9:00-11:00/11:00-13:00 – IPMont - Obtención, observación y datación de embriones de pez cebra transgénicos. - Inyección de oligómeros de morfolino en embriones. 

Día 4 – Jueves 2/11 – 14:00-

Células ganglionares de la retina 

diferenciando ectópicamente en embriones 

de pez cebra mutantes nok-/-. 

Tomado de Zolessi et al., 2006, Figura 7.

16:00 – IPMont (FERIADO) - Observación y datación de embriones inyectados.Día 5 – Viernes 3/11 – 13:00-16:00/16:00-19:00 – IPMont - Montaje de embriones vivos para microscopía. - Observación de embriones en microscopio de fluorescencia.

Carga horaria del práctico por estudiante: 10 hs (aprox.)

Instancias de evaluación del módulo:

A - Presentación y discusión en los seminarios

B - Informe de práctico: 

Escritura de un proyecto de investigación (como para solicitar financiación por un año), en temas relacionados al módulo, y usando algunas técnicas del práctico. Formato: 1. Título; 2- Antecedentes (no más de 1 carilla); 3- Hipótesis; 4- Objetivos; 5- Estrategia experimental (no más de una carilla de texto; puede incluir figuras de resultados preliminares, usen las fotos del práctico); 6- Resultados esperados e impacto (no más de media carilla).

Formato: electrónico (doc o pdf)

Fecha límite de presentación: viernes 17 de noviembre.

Bibliografía básica para el práctico:

            - The Zebrafish Book –Westerfield M. - http://zfin.org/zf_info/zfbook/zfbk.html

            - Kimmel C.B., Ballard W.W., Kimmel S.R., Ullman B. & Schilling T.F. (1995), Stages of Embryonic Development of the Zebrafish, Developmental Dynamics 203:253-310 - http://zfin.org/zf_info/zfbook/stages/stages.html

            - Bill BR, Petzold AM, Clark KJ, Schimmenti LA, Ekker SC (2009) A primer for morpholino use in zebrafish. Zebrafish. 6(1):69-77. doi: 10.1089/zeb.2008.0555. http://online.liebertpub.com/doi/abs/10.1089/zeb.2008.0555

Descargar este cronograma en pdf.

Material de apoyo para el práctico (incluyendo los textos citados; solo accesible a estudiantes y docentes del curso).