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Este módulo se concentra en aspectos celulares del desarollo neural y de la diferenciación neuronal, particularmente en los relacionados a la polaridad celular. Consiste de cuatro instancias en que se combinan teóricos y seminarios, además de un práctico de una semana y media.
HORARIOS 2020:Teóricos / Seminarios:
Día 1 – Martes 20/10 – 10-12 – Zoom
Teórico I. Introducción al desarrollo neural. Polaridad celular en el neuroepitelio.
Introducción al práctico.
Día 2 – Viernes 23/10 – 10-12 – Zoom
Teórico II. Neurogénesis y polaridad celular.
Seminario de discusión de artículos, 1-2.
Día 3 – Martes 27/10 – 10-12 – Zoom
Teórico III. Migración neuronal.
Seminario de discusión de artículos, 3-4.
Día 4 – Viernes 30/10 – 10-12 – Zoom
Teórico IV. Polarización neuronal y crecimiento axonal. Cierre del módulo.
Bibliografía básica: Gilbert SF (2003 en adelante) Developmental Biology.
Célula ganglionar de la retina en embrión de pez cebra (48 hpf).
Imagen de microscopía confocal. Autora: Camila Davison
Artículos a discutir en seminarios (preprints):
Andrew C Symonds, Clare E Buckley, Charlotte A Williams, Jonathan DW Clarke. bioRxiv 2020.02.16.950543; doi: https://doi.org/10.1101/2020.02.16.950543
Amarendra Badugu, Andres Käch. bioRxiv 2020.04.10.036152; doi: https://doi.org/10.1101/2020.04.10.036152
3- Asymmetric neurogenic commitment of retinal progenitors is regulated via the Notch endocytic pathway
Elisa Nerli, Mauricio Rocha-Martins, Caren Norden. bioRxiv 2020.06.30.179499; doi: https://doi.org/10.1101/2020.06.30.179499
4-Tuba activates Cdc42 during neuronal polarization downstream of the small GTPase Rab8a
Pamela J. Urrutia, Felipe Bodaleo, Daniel A. Bórquez, Victoria Rozes-Salvador, Cristopher Villablanca, Cecilia Conde, Mitsunori Fukuda, Christian González-Billault. bioRxiv 2019.12.16.876011; doi: https://doi.org/10.1101/2019.12.16.876011
Práctico: “Manipulación génica en embriones de pez cebra”
Docente responsable: Flavio Zolessi
Ayudantes: Lucía Veloz
Introducción:
El embrión de pez cebra (Danio rerio) presenta múltiples ventajas para la experimentación en Biología del Desarrollo, entre las cuales se cuentan la sencillez de mantenimiento de los adultos y de obtención de huevos fértiles, embriones que son pequeños y transparentes hasta etapas avanzadas del desarrollo y la gran accesibilidad a la manipulación genética. Esta va desde la expresión permanente o transitoria de genes exógenos (transgénesis), la existencia de una gran biblioteca de mutantes relativamente bien caracterizada, la reducción de la expresión mediante oligómeros antisentido (como los morfolinos) o, en los últimos años, la posibilidad de realizar knock-outs génicos dirigidos (por ejemplo mediante la técnica de CRISPR). El objetivo de este práctico es aproximar a los estudiantes de Biología del Desarrollo a algunas de estas tecnologías y su aplicación en embriones de pez cebra.
Cronograma del práctico (tentativo):
Día 1 – Martes 20/10 - 17:00-18:00 - IPMon (asistencia no obligatoria)
- Selección de parejas de adultos para obtención de huevos.
Día 2 – Miércoles 21/10 – 9:00-11:00/11:00-13:00 – IPMon (asistencia obligatoria, en dos grupos)
- Obtención, observación y datación de embriones de pez cebra transgénicos.
- Inyección de oligómeros de morfolino y gRNA/Cas9 mRNA para CRISPR en embriones.
Día 3 – Jueves 22/10 – 9:00-11:00/11:00-13:00 – FCien (asistencia obligatoria)
- Observación y datación de embriones inyectados.
- Fijación de embriones
Día 4 – Viernes 23/10 - 14:00-16:00 - FCien (asistencia no obligatoria)
- Lavado y coloración de embriones con verde de metilo y faloidina-TRITC.
Día 5 – Lunes 26/10 – 9:00-11:00/11:00-13:00 – FCien (asistencia obligatoria)
- Montaje de embriones para microscopía.
Día 6 – Miércoles 28/10 – 10:00-11:00/11:00-12:00 – IPMon (asistencia obligatoria)
- Observación y registro en microscopio confocal.
Día 7 – Jueves 29/10 – 8:00-9:00 – Zoom (asistencia obligatoria)
- Análisis y procesamiento de imágenes usando Fiji.
Día 8 – Viernes 30/10 – 9:30-10:00 – Zoom (asistencia obligatoria)
- Cierre del práctico, discusión.
Carga horaria del práctico por estudiante: obligatoria, 8.5 h; máxima, 11.5 h.
Instancias de evaluación del módulo:
A - Presentación y discusión en los seminarios
B - Informe de práctico:
Escritura de un proyecto de investigación (como para solicitar financiación por un año), en temas relacionados al módulo, y usando algunas técnicas del práctico. Formato: 1. Título; 2- Antecedentes (no más de 1 carilla); 3- Hipótesis; 4- Objetivos; 5- Estrategia experimental (no más de una carilla de texto; puede incluir figuras de resultados preliminares, usen las fotos del práctico); 6- Resultados esperados e impacto (no más de media carilla).
Formato: electrónico (doc o pdf)
Fecha límite de presentación: viernes 20 de noviembre.
Bibliografía básica para el práctico:
- The Zebrafish Book –Westerfield M. - http://zfin.org/zf_info/zfbook/zfbk.html
- Kimmel C.B., Ballard W.W., Kimmel S.R., Ullman B. & Schilling T.F. (1995), Stages of Embryonic Development of the Zebrafish, Developmental Dynamics 203:253-310 - http://zfin.org/zf_info/zfbook/stages/stages.html
- Bill BR, Petzold AM, Clark KJ, Schimmenti LA, Ekker SC (2009) A primer for morpholino use in zebrafish. Zebrafish. 6(1):69-77. doi: 10.1089/zeb.2008.0555. http://online.liebertpub.com/doi/abs/10.1089/zeb.2008.0555
Descargar este cronograma en pdf.
Material de apoyo para el práctico (incluyendo los textos citados; solo accesible a estudiantes y docentes del curso).
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